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铜－ATP酶测定试剂盒(比色法)可用于检测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等样本中的Cu²⁺-ATPase酶，效果均佳。

ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。Cu²⁺-ATPase酶是一种能被钾激活而可被钒酸抑制的酶。

ATP酶存在于组织细胞膜及细胞器膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺O2及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶活力的高低有关。

• 试剂四工作液：用时每支粉剂加双蒸水5mL充分溶解，配完后-20℃以下保存可放7天，不可反复冻融。
  
• 试剂五工作液：用时每支加双蒸水5mL充分溶解(适当加热)。
  
• 试剂六工作液：用时将一支粉剂倒入一瓶溶剂中，充分溶解。
  
• 试剂八工作液：用时每瓶粉剂加双蒸水40mL溶解，4℃保存，颜色变深后弃用。
  
• 试剂九工作液：用时每瓶粉剂加100mL双蒸水溶解，4℃保存。
  
• 0.5μmol/mL标准磷应用液：用时按10mmol/L标准磷贮备液∶双蒸水＝1︰19的比例稀释(如取0.5mL贮备液加双蒸水定容至10mL)配成。
  
• 定磷剂的配制：按试剂八工作液∶试剂九工作液∶ H2O∶2.5mol/L H2SO4＝1∶1∶2∶1的比例及先后顺序配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配，需多少配多少。
  • 配制试剂时，双蒸水、容器等要防止磷污染。

含660nm波长的分光光度计及1cm光径比色皿（或酶标仪及96孔板）、37及45℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）、涡旋混匀器、试管或离心管、烧杯或试剂瓶（配定磷剂用，空试剂瓶本公司有售）、蛋白测定试剂（组织及细胞样本用，本公司有售）。

• 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格，要没有一点磷，最好用除过磷的一次性塑料管或离心管，避免磷污染也是检测成败的关键。
  
• 定磷剂配好后，不可放置太久，一般最多保存一天，最好现用现配。随时放冰箱。
  
• 最好采用先配测定管和对照管混合液，然后按简化操作步骤进行检测，这样快捷、准确。
  
• 所有配试剂的器皿均要专用，包括吸硫酸的吸管及盛水的器皿。
  
• 我公司有加厚的一次性塑料试管供应，请在订购试剂的同时订购一次性塑料试管。

• 样本前处理：
  准确称取组织重量，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制备成10%的组织匀浆，2500转/分，离心10分钟，取得的上清液再用生理盐水按1∶4稀释制备成2%的组织匀浆。
  
• 酶促反应：
  

  成分(μL)	对照管	测定管
  试剂一	130	130
  试剂二		80
  试剂三	120
  试剂四工作液	40	40
  试剂五工作液	40	40
  试剂六工作液		40
  样本		100
  混匀，37℃准确反应10分钟。
  试剂七	50	50
  样本	100
  混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清400μL定磷。

• 定磷反应：
  

  管号	标准管	对照管(A管)	测定管(B管)
  0.5μmol/mL标准磷应用液(μL)	400
  上清液(μL)		400	400
  定磷剂(μL)	2000	2000	2000
  混匀，45℃水浴5分钟，冷却至室温，在660nm处，1cm光径，双蒸水调零，比色。

• 测试前将对照管试剂及测定管试剂分别配成混合试剂A液和B液，具体配法如下：
  根据规范操作表中各管的试剂量乘以您所需要测试的样本数(n)再多配1～2管的量(避免吸到最后试剂量不够)然后纵向混合成A液(对照管的加入液)及B液(测定管的加入液)，具体配制见下表：
  

  成分	对照管(A液)	测定管（B液）
  试剂一	130×(n+2)	130×(n+2)
  试剂二		80×(n+2)
  试剂三	120×(n+2)
  试剂四	40×(n+2)	40×(n+2)
  试剂五	40×(n+2)	40×(n+2)
  试剂六		40×(n+2)
  混合试剂总量	330×(n+2)	330×(n+2)
  每管应吸液量	330	330

• 酶促反应：
  

  成分(μL)	对照管	测定管
  混合试剂A液	330
  混合试剂B液		330
  样本		100
  混匀，37℃水浴准确反应10分钟。
  试剂七	50	50
  样本	100
  混匀，离心3500转/分，离心10分钟，取上清400μL定磷。

• 定磷反应：
  

  成分(μL)	标准管	对照管(A管)	测定管(B管)
  0.5μmol/mL标准磷应用液	400
  对照管上清液		400
  测定管上清液			400
  定磷剂	2000	2000	2000
  混匀，45℃水浴5分钟，冷却至室温，在660nm处，1cm光径， 双蒸水调零，比色，测各管吸光度值A（OD值）。

• 按照实验需要进行蛋白定量（本公司有蛋白测定试剂盒供应）
  
• 定义：规定每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位，即微摩尔磷/毫克蛋白/小时（μmolPi/mgprot/hour）
  
• 计算公式：
  

  Cu2+－ATP酶活力 (μmolPi/mgprot/hour)	＝	A测定－A对照	×C标准×N×	60	÷Cpr
  		A标准		T

  
  C_标准：标准液浓度，0.5μmol/mL；
  N：反应体系稀释倍数，4.8；
  T：反应时间，10分钟；
  Cpr：样本蛋白浓度，mgprot/mL。